TUGAS INDIVIDU FITOKIMIA
REVIEW JURNAL
“Isolation of Three Flavonoids from
Withania Somnifera Leaves
(Solanaceae) and their Antimicrobial Activities”
NAMA : ASTIE AFRIANI
NIM : 1304015078
KELAS : 5D
DOSEN:
NI
PUTU ERMI HIKMAWAN
FAKULTAS FARMASI DAN SAINS
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PROF. DR.
HAMKA
JAKARTA
2015
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar
Belakang
Tumbuhan merupakan sumber berbagai jenis
senyawa kimia mulai dari struktur dan sifatnya yang sederhana sampai yang rumit
sekalipun. Berbagai jenis senyawa kimia yang terkandung dalam tumbuhan akan
bernilai ekonomis dengan adanya khasiat dan manfaat yang dimilikinya. Upaya
pencarian tumbuhan yang berkhasiat telah lama dilakukan baik untuk mencari
senyawa metabolit sekundernya ataupun menambah keanekaragaman senyawa yang
telah ada. Hasil pencarian tersebut dilanjutkan dengan upaya pengenalan zat
kemudian di identifikasi khasiatnya dan dijadikan sebagai bahan obat modern
maupun ekstrak untuk penelitian.
Senyawa yang paling mudah ditemukan
adalah flavonoid karena senyawa ini adalah kelompok senyawa fenol terbesar yang
ditemukan di alam. Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu, biru,
dan sebagai zat berwarna kuning yang ditemukan dalam tumbuh-tumbuhan.
Perkembangan pengetahuan menunjukkan bahwa flavonoid termasuk salah satu
kelompok senyawa aromatik yang termasuk polifenol dan mengandung antioksidan.
Oleh karena jumlahnya yang melimpah di alam, manusia lebih banyak memanfaatkan
senyawa ini dibandingkan dengan senyawa lainnya sebagai antioksidan maupun
aktivitas antibakteri. (Rizkaritonga, 2003).
Withania
somnifera, umumnya dikenal
sebagai ashwagandha, Ginseng India, dan menjadi ramuan yang penting dalam
sistem medis Ayurvedic dan ramuan adat selama lebih 3000 tahun. Secara
historis, tanaman telah digunakan sebagai afrodisiak, tonik hati, agen
anti-inflamasi, astringent, dan baru-baru untuk mengobati bronkitis, asma,
maag, kekurusan, insomnia, dan pikun. (Pattipati, 2003).
Uji klinis dan penelitian hewan
mendukung penggunaan ashwaganda untuk digunakan pada kecemasan, kognitif dan
gangguan saraf, peradangan, dan penyakit Parkinson. Sifatnya yang membuatnya
menjadi tambahan berpotensi berguna untuk pasien radiasi dan kemoterapi
menjalani. (Jawahar, 2006).
Tumbuhan ini memiliki tinggi sekitar 30-150
cm di India Pakistan, Babgla Desh, Sri Lanka dan bagian Afrika Utara. Hal ini
juga ditemukan di Kongo, Afrika Selatan, Mesir, Maroko, Yordania, Pakistan dan
Afganistan. (Kokate, 1996).
Flavonoid dapat dianggap sebagai turunan
dari senyawa induk 2-phenylchromone terdiri dari dua cincin fenil, dan cincin
heteocyclic disebut sebagai A-Cincin C-. (Yao, 2004). Flavonoid merupakan
metabolit sekunder ditandai dengan inti flavan (Heim, 2002) dan carbonskeleton
C6-C3-C6 (Tsuchiya, 2010). Ini adalah kelompok struktural
terkait dari senyawa dengan chromane-jenis kerangka yang memiliki fenil substituen
pada posisi C2-C3 (Rijke, 2005). Flavonoid milik satu senyawa
bioaktif yang secara alami. Flavonoid alami telah dijelaskan dan subkategorikan
ke dalam flavon, flavans, flavanon, isoflavonoid, chalcones, aurones dan
anthocyanidines (Amanlou- Veitch NC, 2005).
Flavonoid ini memiliki fungsi aktivitas
biologis yang luar biasa, termasuk efek penghambatan pada enzim, efek modulasi
pada beberapa jenis sel, perlindungan terhadap alergi, antivirus, anti-malaria,
antioksidan, antiinflamasi dan sifat anti-karsinogenik (Amanlou- Veitch NC,
2005). Sebuah jenis dari flavon, flavonol, flavanon, isoflavon dan, serta beberapa
turunannya metoksi, isoprenyl, dan terasilasi, menunjukkan adanya aktivitas
antibakteri (Harborne, 2000).
Kebanyakan bakteri dapat dibagi menjadi
dua kelompok berdasarkan noda yang dikembangkan oleh Denmark dokter Hans
Christian Gram pada tahun 1884 (Volk WA, 1991). Prosedur ini didasarkan pada
kenyataan bahwa bakteri Gram positif mempertahankan Kristal kompleks violet-iodine
melalui dekolorisasi dengan alkohol atau bakteri aseton dan Gram-negatif tidak.
Gram positif bakteri memiliki lapisan peptidoglikan yang tebal pada dinding sel
mereka sedangkan Gram bakteri negative memiliki sebuah peptidoglikan yang
berlapis tipis ditambah membran luar lipopolisakarida (Benson, 2004).
1.2 Tujuan
Mengetahui dan mempelajari proses
isolasi senyawa flavonoid dari bahan alam atau tanaman Withania Somnifera pada bagian batang. Dan sebagai salah satu tugas
akhir mata kuliah fitokimia untuk menganalisis jurnal ilmiah.
BAB II
PEMBAHASAN
2.1
Bahan dan Metode
Prosedur percobaan umum yaitu
menggunakan Reagen kelas analitik yang digunakan untuk analisis beberapa
flavonoid dari Withania somnifera.
Spektrum UV dicatat dengan Shimadzo 1601 Spektrofotometer UV dan lampu
digunakan untuk lokalisasi tempat neon di TLC dan PC. Spektrum dijalankan pada
Thermo Nicolet FTIR 300 sebagai disk KBr, menggunakan Shimadzu IR-8400 Spectrophotometer.
Nuklir Magnetic Spektrum resonansi dijalankan pada JEOL DELTA esp-500 MHZ NMR
Spektrofotometer. Titik leleh ditentukan pada Kofler panas-Tahap Aparatur. Massa
Spektrum dicatat oleh probe EIMS langsung menggunakan Shimadzu GCMS-QP5050
spektrometer dengan ionisasi yang disebabkan oleh dampak elektron.
2.2 Pengumpulan
Bahan Tanaman
Daun Withania
somnifera (Solanaceae) yang
dikumpulkan pada Maret 2010 dari Erkowit (timur dari Sudan) dan dikonfirmasi oleh
Dr Hassan Mustafa Hassan, Dept botani, Universitas Khartoum, dan sampel
diendapkan oleh departemen herbarium.
2.3 Ekstraksi
Daun Withania somnifera
Daun yang sudah dikeringkan menjadi
bubuk kasar sejumlah 1,0 Kg dari Withania
somnifera kemudian di blender sampai menjadi bubuk halus dan diekstraksi
dengan kloroform untuk menghilangkan klorofil, resin dan bahan lilin. Bahan
diekstraksi dengan 85% metanol dan didiamkan dengan suhu ruang 250C
selama 24 jam dengan sesekali diaduk. Ekstrak kemudian dituang dan disaring
oleh vakum penyaringan. Ekstraksi diulang dua kali dengan pelarut yang sama dan
kedua kalinya dengan 50% methanol. Kemudian filtrat dari masing-masing
ekstraksi dikombinasikan dan pelarut yang berlebih diuapkan di bawahnya untuk
mengurangi tekanan dengan suhu 40°C menggunakan rotary evaporator untuk
memberikan ekstrak kental, (53g) dari massa yang solid dan kemudian pindahkan
ke dalam gelas wadah untuk digunakan.
2.4 Skrining
fitokimia Withania somnifera
Ekstrak metanol diuji untuk
mengidentifikasi adanya senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid, steroid,
terpenoid, alkaloid, saponin, dan tanin. Prosedur standar yang biasa digunakan
adalah:
a.
Flavonoid
·
Sebanyak 3 ml dari ekstrak metanol diteteskan dengan aluminium
klorida methanol. Bila menghasilkan warna kekuningan, maka warna menunjukkan
adanya flavonoid.
·
Sebanyak 3 ml diteteskan
dengan metanol kalium hidroksida. Bila menghasilkan warna kuning gelap, maka positif
untuk senyawa flavonoid.
·
Shinoda Test:
Potongan kecil Magnesium ditetesi dengan beberapa tetes asam klorida pekat dan
teteskan ekstrak methanol dari simplisia. Pembentukan warna merah merah menunjukkan
adanya flavon di glikosidik.
b.
Steroid dan
Terpenoid
·
Sebanyak 40 ml
dari ekstrak methanol yang telah diuapkan dengan evaporator kemudian dikeringkan
dengan waterbath, kemudian residu didinginkan dan diaduk dengan petroleum eter
untuk menghilangkan sebagian besar bahan pewarna. Residu diekstraksi dengan 20
ml kloroform. Larutan Kloroform menyerap natrium sulfat anhidrat.
·
Sebanyak 5 ml
bagian dicampur dengan 0,5 ml asetat anhidrida, dan ditambahkan oleh dua tetes
asam sulfat pekat. Bila menghasilkan warna hijau lalu diamati maka menunjukkan
adanya atau positif steroid dan tidak ada warna pink-ungu jika diamati maka menunjukkan
tidak adanya atau negative terpenoid.
c.
Alkaloid
Sebanyak (30 ml)
dari ekstrak metanol yang telah diuapkan dengan evaporator kemudian dikeringkan
dengan waterbath. Ditambahkan sebanyak 5 ml 2N asam klorida dan larutan
dipanaskan dengan pengadukan dalam waterbath selama 10 menit. Campuran
didinginkan dan disaring. Sebanyak 2 ml dari filtrat, ditambahkan beberapa
tetes reagen Mayer (Kalium iodide merkuri). Menghasilkan endapan jika diamati
menunjukkan adanya atau positif alkaloid.
d.
Saponin
Sebanyak
20 ml air ditambahkan 0,25 g ekstrak dalam 100 ml gelas dan direbus atau
dipanaskan, kemudian disaring dan kemudian filtrat digunakan untuk tes:
Buih
Test: 5 ml filtrat diencerkan dengan 20 ml air dan dikocok dengan cepat. Menghasilkan
buih stabil (busa) dan menunjukkan adanya atau positif saponin.
e.
Tanin
Sebanyak 25 ml
dari ekstrak metanol yang telah diuapkan dengan evaporator kemudian dikeringkan
dengan waterbath dan residu diekstraksi dengan n-hexane dan disaring. Bagian
yang tidak larut oleh n-hexane diaduk dengan 10 ml larutan garam panas (0,9% b
/ v natrium klorida dan aquadest). Kemudian campuran didinginkan dan disaring, volume
disesuaikan dengan 10 ml dengan larutan garam lebih. Sebanyak 5 ml larutan ini
diteteskan dengan beberapa tetes larutan klorida, jika terbentuk warna biru
adalah menunjukkan adanya tanin atau positif tanin.
2.5 Isolasi
Flavonoid
Ekstrak kering dimasukan kedalam kolom poliamida
6S-kromatografi (80 x 3 cm). Kolom dielusi dengan air, dan kemudian dengan
campuran dari methanol-air akan menurunkan polaritas dan 7 fraksi dikumpulkan.
Fraksi utama diperoleh dari gabungkan menjadi tiga fraksi setelah analisis
kromatografi. Fraksi A (5 g) difraksinasi oleh PC, menggunakan Whatman No. 3
dan (n-butanol: asam asetat:
air) lapisan atas sebagai sistem pelarut diikuti
oleh Sephadex LH-20 kolom dielusi dengan metanol (100%) dan metanol / air (9:
1), untuk mendapatkan dua senyawa murni yaitu
senyawa W1 (29 mg) dan Senyawa W2 (36mg). Fraksi B (3 g) menjadi percobaan
untuk kromatografi kolom pada selulosa dan n-BuOH jenuh dengan air sebagai
pelarut elusi untuk memberikan dua sub fraksi utama, maka masing-masing
terpisah dan difraksinasi dengan Sephadex LH-20 untuk menghasilkan senyawa murni
W3 (27 mg) dan senyawa W4 (21 mg).
2.6 Hasil dan
Diskusi
Penapisan fitokimia dari Withania somnifera dalam ekstrak metanol
mengungkapkan adanya alkaloid, Steroid, saponin dan senyawa fenolik (flavonoid,
dan tanin). Berat dan persentase hasil senyawa murni yang diekstraksi dari Withania somnifera (dilampirkan pada
tabel 1)
Komponen Senyawa Murni
|
Berat
|
% Nilai
|
Komponen W1
|
29
|
0,58
|
Komponen W2
|
36
|
0,72
|
Komponen W3
|
27
|
0,77
|
Ekstrak metanol daun Withania somnifera di fraksinasi dengan
kromatografi kolom poliamida untuk memberikan beberapa fraksi, yang selanjutnya
pada Sepadex LH 20 dan selulosa untuk menhasilkan tiga senyawa w1, w2 dan w3.
Struktur flavonoid tersebut ditandai di kampirkan pada (tabel 1) IR. Reagen
NaOMe, AlCl3,AlCl3 / HCl, dan menyatu NaOAc / H3BO3 reagen yang secara terpisah
ditambahkan ke dalam larutan metanol yang diketahui material dan UV pengukuran
kemudian disimpan di (tabel 4) untuk menentukan posisi gugus hidroksil.
Senyawa W1 menyerap di λ max (MeOH) 267,
350 nm karena benzoil dan sinamoil kromofor dari bagian flavonol. NaOMe
memperlihatkan pergeseran batokromik dari 52 nm menunjukkan 4`- OH. NaOAc
memberikan sekitar 7 nm menunjukkan 7-OH, juga pergeseran dari spektrum asam
borat menunjukkan katekol bagian. 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) angka (1)
menunjukkan δ (ppm): δ 3,0-3,5 (m, 3H) di indikasikan untuk fungsi methoxyl; δ
4,2-5 (m, 6H) perhitungan untuk proton gula; (s, 1H) δ 6.04 dan δ 6,25 (d, 1H),
perhitungan untuk C6- dan C8- H masing-masing.
Resonansi di δ 6.84 dan 7.98 ppm di
indikasikan untuk cincin aromatik H cincin B-. Tes buih mengungkapkan sifat
glikosidik senyawa (W1), asam setelah selesai hidrolisis dan kertas berikutnya
kromatografi gula mengidentifikasi adanya
sebagai galaktosa.
Senyawa W2 menyerap di λ max (MeOH) 267,
350 nm, spektrum NaOMe memperlihatkan pergeseran batokromik dari + 49 nm (tabel
4) menunjukkan adanya 4`-OH dan tidak adanya 3-OH. Hasil pergeseran UV dan
1H-NMR menjelaskan struktur w2 (gambar: 2).
UV Data spektral senyawa W3 di MeOH
ditandai sebuah flavon dengan tiga kelompok hidroksil. Penambahan NaOMe memberikan
pergeseran batokromik 30 nm (tabel 4) menunjukkan dari 4`-OH. Juga 7-OH dan katekol
bagian dalam cincin B yang ditandai dengan pergeseran, reagen NaOAc dan NaOAc /
H3BO3 masing-masing. 1H-NMR spektrum W3 (Gambar: 3) menunjukkan: δ 3.2- 3.9 (m)
di indikasikan untuk proton gula. Selanjutnya, hanya ada satu sinyal anomeric proton
gula bagian melekat pada flavonoid (doublet pada δ 5,4) membuktikan kehadiran bagian
rhamnosyl (dengan gugus metil 1,1ppm). Resonansi di δ 6.15 dan 6.7 (d, 2H) di
indikasikan adanya C6- dan C8- H pada sinyal pada δ (s, 1H) 6.92, 7.03 (s, 1H) dan
7,41 (d, 1H) yang khas untuk flavon cincin B dengan 3`- dan 4`-OH. Resonansi
pada δ 8 ppm adalah karakteristik dari C5-H.
Hidrolisis asam lengkap senyawa W3 dan Studi
UV berikutnya dari aglikon yang dihasilkan menggunakan shift reagen AlCl3
menunjukkan 3-hidroksil dan ini justru mengutip dari glikosilasi. Aglikon senyawa
W3 tampaknya menjadi flavon trihidroksi.
BAB III
KESIMPULAN
Sebuah studi fitokimia dari daun Withania somnifera di ujicoba. Dari
ekstrak metanol Withania somnifera menghasilakan tiga metabolit sekunder yaitu
flavonoid yang di isolasi dan dimurnikan menggunakan teknik kromatografi yang
berbeda. Senyawa ini (W1,W2 dan W3) diidentifikasi melalui alat spektroskopi: IR,
UV, 1H NMR, dan MS spektroskopi. W1 adanya sebagai galaktosa, W2 adanya flavon
dengan tiga kelompok hidroksil, bagian rhamnosyl (dengan gugus metil), W3
adanya flavon trihidroksi.
Ekstrak kasar dan murni senyawa
menunjukkan aktivitas moderat terhadap manusia patogen: Bacillus subtilis,
Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus
aureus.
JOURNAL YANG DIREVIEW:
Isolation of Three Flavonoids from Withania Somnifera Leaves (Solanaceae) and their Antimicrobial Activities
DOWNLOAD KLIK DISINI
Isolation of Three Flavonoids from Withania Somnifera Leaves (Solanaceae) and their Antimicrobial Activities
DOWNLOAD KLIK DISINI
DAFTAR PUSTAKA
Ritonga,
Rizka. 2013. Isolasi dan Identifikasi
Flavonoid. http://rizkaritonga.blogspot.co.id/2013 diakses tanggal 20 Desember 2015, 3:38AM.
Bashir, H. S; Mohammed, A; Magsoud, A; Shaoub, A.
2013. JOURNAL OF FOREST PRODUCTS & INDUSTRIES. “Isolation of Three Flavonoids from Withania Somnifera Leaves
(Solanaceae) and their Antimicrobial Activities” Research
Publisher. University of Bahri, Sudan.
Artikel Terkait
Luangin waktumu untuk Share this article with your friends
0 Comments
: 
: 
: 
Twitter Timeline
